實驗應用:鼠尾膠原為底物的人鼻腔纖毛上皮細胞培養模式的建立目的建立以鼠尾膠原為貼附底物的人鼻腔纖毛上皮細胞的體外培養模式,為人鼻腔黏液纖毛運輸系統的研究提供科學有效的方法.方法制備鼠尾膠原并鋪片,以鼠尾膠原為貼附底物組織塊培養法培養人鼻腔纖毛上皮細胞,培養7天時進行HE染色及掃描電鏡和透射電鏡觀察細胞形態和結構,應用高速攝像技術測量纖毛擺動頻率.結果鼠尾膠原要平坦均勻,平均厚度約為1mm;HE染色可見上皮細胞呈單層向周圍爬開;掃描電鏡下見纖毛上皮細胞呈不規則多角形,纖毛周圍可見微絨毛;透射電鏡下可見纖毛上皮細胞間為緊密連接;同一細胞任意兩點纖毛擺動頻率是相同的;同一來源體外培養的鉤突和下鼻甲的...
鼠尾膠原在心肌細胞氧化損傷中的保護作用:膠原蛋白具有抗氧化作用,但既往在實驗室主要將鼠尾膠原用于促進細胞貼壁和支架構建,對于其抗氧化作用目前尚無相關研究。目的:探討鼠尾膠原對過氧化氫導致離體心肌細胞氧化損傷的保護作用。方法:將原代培養的SD大鼠乳鼠心肌細胞隨機接種到鋪有鼠尾膠原的培養皿(實驗組)和普通培養皿(對照組)中,并且均用0,10,100μmol/LH2O2誘導。24h后,以電子顯微鏡觀察各組乳鼠心肌細胞的形態,應用MTT比色法檢測心肌細胞存活率,TUNEL法檢測心肌細胞凋亡形態,流式細胞技術檢測心肌細胞凋亡率,黃嘌呤氧化酶法檢測超氧化物歧化酶活力,硫代巴比妥比色法檢測丙二醛水平,Wes...
鼠尾膠原包被培養板:胎干細胞在體外可誘導分化為血管內皮細胞,進而形成血管,因而成為血管組織工程理想的種子細胞來源之一。目的:探討建立定向誘導人胚胎干細胞向血管內皮細胞分化的方法。方法:在小鼠胚胎成纖維細胞飼養層上培養人胚胎干細胞H1,將H1細胞團塊轉移到鼠尾膠原包被的培養板,貼壁24-48h后,培養基換為含不同輔助因子和內皮細胞生長添加劑的EGM-2內皮細胞培養基。結果與結論:①在EGM-2內皮細胞培養基誘導下,細胞逐步表達內皮細胞特異性標記基因VEGFR-2、PECAM1、vWF、CD34、VE-cadherin、GATA-2。②分化細胞表達內皮細胞特異性標記VE-cadherin、CD31...
鼠尾膠原簡介:鼠尾I型膠原蛋白(Collagenfromrattail,TypeI)系采用Birkedal-Hansen方法在無菌下制備,純度達到95%以上,可溶于0.006mol/L乙酸。本品可用于細胞培養皿的包被,特別適合普通細胞培養器皿不易貼壁細胞的培養;也可用于制備三維膠原凝膠,使細胞在模擬的三維環境中生長。質量標準:1、SDS-PAGE分析純度大于95%。2、無菌檢驗結果為陰性。3、本品2μg/cm2包被細胞培養皿后培養PC-12細胞,貼壁及生長正常。4、本品濃度1mg/mL,pH7.0時形成具有一定強度的三維膠原凝膠,NIH-3T3細胞在三維凝膠內生長正常、PC-12細胞在三維凝膠...
一種海貍鼠尾膠原手術縫合線制備方法,其特征在于,步驟如下:(1)膠原紡絲液的配制:將備用的海貍鼠尾筋切成薄片,用無花果蛋白酶進行酶解處理,再用雙氧水溶液殺酶;將殺酶后的切片用蒸餾水沖洗,然后用乙酸溶液溶脹,把溶脹后的切片分散攪拌,然后用濾網過濾,除去雜質及不溶脹物,然后把該溶液離心脫泡制得膠原紡絲溶液;(2)手術縫合線纖維的成形:將膠原紡絲液裝入立式向上濕法紡絲機的紡絲液貯罐中,用氮氣擠壓入含有pH=8-11、質量濃度為50-80%的硫酸鈉溶液的立式凝固浴中凝固成型,再經過質量濃度為60-90%的乙醇水溶液的脫水浴脫水,再經過假捻器加捻,合股后再進入含有pH=9-11、質量濃度為0.8-1.2...
實驗應用:鼠尾膠原為底物的人鼻腔纖毛上皮細胞培養模式的建立目的建立以鼠尾膠原為貼附底物的人鼻腔纖毛上皮細胞的體外培養模式,為人鼻腔黏液纖毛運輸系統的研究提供科學有效的方法.方法制備鼠尾膠原并鋪片,以鼠尾膠原為貼附底物組織塊培養法培養人鼻腔纖毛上皮細胞,培養7天時進行HE染色及掃描電鏡和透射電鏡觀察細胞形態和結構,應用高速攝像技術測量纖毛擺動頻率.結果鼠尾膠原要平坦均勻,平均厚度約為1mm;HE染色可見上皮細胞呈單層向周圍爬開;掃描電鏡下見纖毛上皮細胞呈不規則多角形,纖毛周圍可見微絨毛;透射電鏡下可見纖毛上皮細胞間為緊密連接;同一細胞任意兩點纖毛擺動頻率是相同的;同一來源體外培養的鉤突和下鼻甲的...
鼠尾膠原蛋白的提取方法:1.一種生物醫用鼠尾膠原蛋白的提取方法,其特征在于,包括以下步驟:(1)將無組織纖維、脂肪和多糖殘留的鼠尾腱,真空冷凍干燥備用;(2)凍干鼠尾腱經低溫凍干粉碎至200?400目;(3)在冰水浴中將粉碎的鼠尾腱在醋酸溶液中溶脹,鼠尾腱與醋酸的固液比為I克:10mL?I克:120mL,期間不斷攪拌,防止凍結成塊,得到膠原溶脹液;(4)稱取胃蛋白酶加入到膠原溶脹液中,鼠尾腱與蛋白酶質量比為50:I?100:1,在4°C,48?74小時酶解,期間間歇性攪拌。將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中,制備成濃度為0.1%的溶液。青島正規鼠尾膠原進貨價一種基于鼠尾膠原蛋白:1.根據權利要求...
鼠尾膠原簡介:鼠尾I型膠原蛋白(Collagenfromrattail,TypeI)系采用Birkedal-Hansen方法在無菌下制備,純度達到95%以上,可溶于0.006mol/L乙酸。本品可用于細胞培養皿的包被,特別適合普通細胞培養器皿不易貼壁細胞的培養;也可用于制備三維膠原凝膠,使細胞在模擬的三維環境中生長。質量標準:1、SDS-PAGE分析純度大于95%。2、無菌檢驗結果為陰性。3、本品2μg/cm2包被細胞培養皿后培養PC-12細胞,貼壁及生長正常。4、本品濃度1mg/mL,pH7.0時形成具有一定強度的三維膠原凝膠,NIH-3T3細胞在三維凝膠內生長正常、PC-12細胞在三維凝膠...
鼠尾膠原是一種天然培養基,它具有促進體外培養細胞(特別是上皮細胞)貼壁的作用,同時它也是一種天然的黏附劑,當我們需要在培養瓶或培養皿內放置小玻片,制備細胞爬片時,可在瓶底涂一層膠原,再放上小玻片,自然干燥后小玻片就固定于培養瓶之中。通過本實驗可掌握鼠尾膠原的制備方法,以及如何切割小玻片,并利用鼠尾膠原將其固定于培養瓶內。實驗設備及材料:大鼠尾巴、剪刀、鑷子、止血鉗、彎頭吸管、平皿、三角燒瓶、燒杯、量筒、天平、生理鹽水、75%酒精、0.1%醋酸溶液、蓋玻片、培養瓶、鉆石筆、鼠尾膠原。實驗內容:1、制備鼠尾膠原。2、切割小玻片。3、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養瓶內。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,涂...
鼠尾膠原凝膠體在皮膚細胞原代培養中的應用:在國外的藥理,毒理和皮膚病學的研究領域中已得到的限翩,否則培養成功率極低.本文采用鼠尾膠原凝膠體作為滋養層,提高了培養細胞的材料和方法r1]實驗材料:培養液DEIdE(G皿}ao),表皮細胞生長因子(EGFSigma),小牛血清(上海祟明生物制品廠),氫化可的松,胰島素(Sigm,青,鏈霉素,胰蛋白酶,]~DTA,細胞培養皿~35mill(00rningrSA).(2)皮膚基底細胞的分離和細胞懸液的制備:2~3d的新生大鼠(wisr),以75%酒精消毒背部皮膚,剪下皮膚后.以消化12h.輕刷表皮面,收集細胞懸液,加入細胞培養液.用梯度離心收集細胞,以3...
一種基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料及其制備方法:膠原蛋白是脊椎動物和無脊椎動物支持結構的主要組成。在人的身體中這是皮膚、筋、軟骨、骨骼及結締組織的較主要的蛋白質。膠原蛋白占人體蛋白質總量的三分之一,不論來源于哪一種動物或哪一種組織的膠原都有許多共同特性。氨基酸組成中約有三分之一為甘氨酸,有脯氨酸和羥脯氨酸。根據其遺傳分子結構遺傳基因的差別,膠原蛋白分為20幾個亞型。但較為常見的為Ι、Π、ΙΙΙ型膠原蛋白,即間質膠原蛋白。其中I型較為豐富且品質優良。I型膠原蛋白分布非常普遍,是主纖維束的主要成分,給結締組織以強度;是較豐富的膠原蛋白類型,尤其是在皮膚真皮、骨、筋和腱中。在室溫中攪拌1-3小...
一種海貍鼠尾膠原手術縫合線制備方法,其特征在于,步驟如下:(1)膠原紡絲液的配制:將備用的海貍鼠尾筋切成薄片,用無花果蛋白酶進行酶解處理,再用雙氧水溶液殺酶;將殺酶后的切片用蒸餾水沖洗,然后用乙酸溶液溶脹,把溶脹后的切片分散攪拌,然后用濾網過濾,除去雜質及不溶脹物,然后把該溶液離心脫泡制得膠原紡絲溶液;(2)手術縫合線纖維的成形:將膠原紡絲液裝入立式向上濕法紡絲機的紡絲液貯罐中,用氮氣擠壓入含有pH=8-11、質量濃度為50-80%的硫酸鈉溶液的立式凝固浴中凝固成型,再經過質量濃度為60-90%的乙醇水溶液的脫水浴脫水,再經過假捻器加捻,合股后再進入含有pH=9-11、質量濃度為0.8-1.2...
一種基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料及其制備方法:膠原蛋白是脊椎動物和無脊椎動物支持結構的主要組成。在人的身體中這是皮膚、筋、軟骨、骨骼及結締組織的較主要的蛋白質。膠原蛋白占人體蛋白質總量的三分之一,不論來源于哪一種動物或哪一種組織的膠原都有許多共同特性。氨基酸組成中約有三分之一為甘氨酸,有脯氨酸和羥脯氨酸。根據其遺傳分子結構遺傳基因的差別,膠原蛋白分為20幾個亞型。但較為常見的為Ι、Π、ΙΙΙ型膠原蛋白,即間質膠原蛋白。其中I型較為豐富且品質優良。I型膠原蛋白分布非常普遍,是主纖維束的主要成分,給結締組織以強度;是較豐富的膠原蛋白類型,尤其是在皮膚真皮、骨、筋和腱中。鼠尾膠原蛋白的用途是...
為了能夠從小鼠身上提取足夠的DNA,要從它們身上取下足量的細胞用于實驗。為了盡可能減少對動物的傷害和方便試驗人員的操作,剪下一小段鼠尾是一個不錯的選擇。就讓我們來盤點一下「耗子尾汁」的三種用法↓↓↓鼠尾取血剪下幾毫米小鼠尾巴、在小鼠尾靜脈上劃一道小口、用注射器抽取的操作都可以得到這種鮮紅的「耗子尾汁」。它可以用于監測小鼠血液成分的變化,確認小鼠是否患上了糖尿病或者某些能夠改變小鼠的血糖等。比起心臟和眼部取血,實驗用鼠尾尖取血的取血量較小,但取血之后,小鼠還能繼續下一步建模或者實驗,完全沒有性命之憂。鼠尾膠原醋酸溶解:氯仿的量約為膠原溶液的10%。上海鼠尾膠原供應商膠原蛋白的適用征狀:1、由于工...
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項:通過醋酸抽提、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的。鼠尾膠原蛋白可用于包被細胞培養器皿,培養一些在普通細胞培養器皿中不易貼壁的細胞。也可用于制備三維膠,模擬真實的生長環境,使細胞在三維環境中生長。1,在使用鼠膠原蛋白型包被的細胞培養皿中檢查到PC-12細胞的貼壁和生長。1mg/ml濃度以上,pH左右時可形成具有一定強度的三維膠,檢查到NIH-3T3細胞在三維膠內正常生長、PC-12細胞在三維膠表面正常生長。使用方法:1、細胞培養器皿的表面包被推薦濃度:1-5ug/cm0.012mg/ml。按以下表格體積加到相應的培養器皿中。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,涂布...
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項:三維膠原的制備鼠尾膠原蛋白型在濃度1mg/ml以上,pH左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中,在成膠過程中需要加入0.06體積的0.1mol/LNaOH來中和。需要的溶液(均需要無菌、預冷)10mg/L酚紅用于pH指示)0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一般不用),雙蒸水200ul鼠尾膠原蛋白型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,加入690ulH2O12ul0.1mol/LNaOH12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結)...
鼠尾膠原:含細胞三維膠原凝膠的制備(以配制1mg/mL三維膠1mL為例)準備好懸浮于培養液的細胞,并放置于冰浴中。將200μL本品加到12μL0.1mol/LNaOH中(如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結),立即混勻。再加入23μL10×PBS或10×培養液,混勻后立即加到培養器皿中(混勻后pH為7左右,如果PBS或培養液中沒有加酚紅,初次使用時需要測定pH值)。加入760μL的細胞懸浮液,混勻后立即加到培養器皿中。將培養器皿在室溫放置20min待膠凝固后,加入適當體積的細胞培養液,轉移到培養箱中培養。本品在室溫下pH中性...
一種海貍鼠尾膠原手術縫合線制備方法,其特征在于,步驟如下:(1)膠原紡絲液的配制:將備用的海貍鼠尾筋切成薄片,用無花果蛋白酶進行酶解處理,再用雙氧水溶液殺酶;將殺酶后的切片用蒸餾水沖洗,然后用乙酸溶液溶脹,把溶脹后的切片分散攪拌,然后用濾網過濾,除去雜質及不溶脹物,然后把該溶液離心脫泡制得膠原紡絲溶液;(2)手術縫合線纖維的成形:將膠原紡絲液裝入立式向上濕法紡絲機的紡絲液貯罐中,用氮氣擠壓入含有pH=8-11、質量濃度為50-80%的硫酸鈉溶液的立式凝固浴中凝固成型,再經過質量濃度為60-90%的乙醇水溶液的脫水浴脫水,再經過假捻器加捻,合股后再進入含有pH=9-11、質量濃度為0.8-1.2...
鼠尾膠原實驗應用:探討應用鼠尾膠原在豚鼠前庭毛細胞膜片鉗實驗中的促進毛細胞貼壁效果。方法制作鼠尾膠原,觀察全細胞膜片鉗實驗中,自制的鼠尾膠原對前庭毛細胞的貼壁黏附作用。結果無鼠尾膠原時,前庭毛細胞懸浮于外液,不宜封接;有鼠尾膠原時,前庭毛細胞貼附于培養皿底壁,易于封接和長時間(約8h)的觀察和記錄。鼠尾膠原對前庭毛細胞具有良好的貼壁黏附促進作用。結論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,并且制作簡便,成本低廉。一種基于鼠尾膠原蛋白:根據權利要求1所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料。正規鼠尾膠原服務電話一種海貍鼠尾膠原手術縫合線制備方法,其特征在于,步驟如下...
膠原的立體結構與一般的球狀蛋白質完全不同,每一條亞基形成一股左手旋轉的螺旋,其中每3個氨基酸殘基形成一圈螺旋。3條左手螺旋再扭在一起形成一個右手大螺旋。這樣的螺旋稱為3股螺旋。小的甘氨酸殘基位于3股螺旋內部。3股螺旋式的棒狀膠原分子的大小約是3000×15埃,這些棒狀分子首尾相連,并側向排列形成膠原微絲(其直徑可從50埃至數千埃)。膠原分子在兩端及沿軸向每隔680埃的距離存在極性區,這些極性區能和重金屬離子結合,使膠原纖維在電子顯微鏡下形成間距為680埃的明暗相間的特征性的橫紋結構。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,并且制作簡便,成本低廉。鼠尾Ⅰ型膠原:選擇...
鼠尾膠原蛋白的提取方法:1.將黏稠的膠體溶液進行高速冷凍離心處理,收集上清液;在冰水浴中,用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中,不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出,4°C沉淀10小時,去除上清液,絮狀溶液高速冷凍離心處理,收集沉淀2.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸溶液溶解沉淀物,成透明澄清黏稠溶液;在冰水浴中,調節pH=6.5,用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中,不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出,4°C沉淀10小時,去除上清液,去除上清液,絮狀溶液高速冷凍離心處理,收集沉淀。鼠尾膠原蛋白 型在濃度1mg/ml 以上, pH 左右時可形成具有一定強度三...
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項:通過醋酸抽提、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的。鼠尾膠原蛋白可用于包被細胞培養器皿,培養一些在普通細胞培養器皿中不易貼壁的細胞。也可用于制備三維膠,模擬真實的生長環境,使細胞在三維環境中生長。1,在使用鼠膠原蛋白型包被的細胞培養皿中檢查到PC-12細胞的貼壁和生長。1mg/ml濃度以上,pH左右時可形成具有一定強度的三維膠,檢查到NIH-3T3細胞在三維膠內正常生長、PC-12細胞在三維膠表面正常生長。使用方法:1、細胞培養器皿的表面包被推薦濃度:1-5ug/cm0.012mg/ml。按以下表格體積加到相應的培養器皿中。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,涂布...
膠原的立體結構與一般的球狀蛋白質完全不同,每一條亞基形成一股左手旋轉的螺旋,其中每3個氨基酸殘基形成一圈螺旋。3條左手螺旋再扭在一起形成一個右手大螺旋。這樣的螺旋稱為3股螺旋。小的甘氨酸殘基位于3股螺旋內部。3股螺旋式的棒狀膠原分子的大小約是3000×15埃,這些棒狀分子首尾相連,并側向排列形成膠原微絲(其直徑可從50埃至數千埃)。膠原分子在兩端及沿軸向每隔680埃的距離存在極性區,這些極性區能和重金屬離子結合,使膠原纖維在電子顯微鏡下形成間距為680埃的明暗相間的特征性的橫紋結構。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,并且制作簡便,成本低廉。制備鼠尾膠原:取大...
三維膠原的制備:鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上,pH7左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中,在成膠過程中需要加入0.06X體積的0.1mol/LNaOH來中和。需要的溶液(均需要無菌、預冷):10xPBS(可含10mg/L的酚紅用于pH指示)或10x培養液,0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一般不用),雙蒸水A.不含細胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,1mg/ml三維膠為例):將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,加入690ulH2O。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中...
鼠尾膠原使用方法:1、細胞培養器皿的表面包被以包被濃度為2μg/cm2為例,用無菌0.006mol/L乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/mL。加到相應的培養器皿中,確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面。開蓋在超凈臺上過夜晾干,也可以在室溫放置1小時后,用PBS洗3~4次后直接使用。包被好的器皿在4~25℃至少可保存三個月以上的時間。三維膠原凝膠的制備:A、無細胞三維膠原凝膠的制備(以配制1mg/mL三維膠1mL為例)將200μL本品加到置于冰浴的離心管中,加入690μL雙蒸水,然后加到12μL0.1mol/LNaOH中(如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能...
細胞培養過程中,細胞需要貼附在培養皿表面(懸浮培養細胞除外)才能完成生長過程,而有一些細胞卻總是不太給力,自己完成不了貼壁過程或者貼壁困難,這個時候鼠尾膠原蛋白就能承擔起讓細胞更容易貼壁的作用。這一步也被稱作涂層(coating),給培養皿涂上了一層膠原蛋白后,細胞就能更好地貼附上去,除了培養皿,一些需要使用海藻碳酸鈣微球培養得細胞,同樣也可以用鼠尾膠原蛋白協助細胞貼壁生長。耗子尾汁還能變得更加,一種被稱作鼠尾膠原蛋白的“珍貴”液體就來自大鼠的尾巴,制作過程需要經歷醋酸抽提從包被表面除去多余的液體。過夜干燥。成都正規鼠尾膠原廠家推薦鼠尾膠原蛋白的提取方法:1.一種生物醫用鼠尾膠原蛋白的提取方法...
實驗應用:鼠尾膠原為底物的人鼻腔纖毛上皮細胞培養模式的建立目的建立以鼠尾膠原為貼附底物的人鼻腔纖毛上皮細胞的體外培養模式,為人鼻腔黏液纖毛運輸系統的研究提供科學有效的方法.方法制備鼠尾膠原并鋪片,以鼠尾膠原為貼附底物組織塊培養法培養人鼻腔纖毛上皮細胞,培養7天時進行HE染色及掃描電鏡和透射電鏡觀察細胞形態和結構,應用高速攝像技術測量纖毛擺動頻率.結果鼠尾膠原要平坦均勻,平均厚度約為1mm;HE染色可見上皮細胞呈單層向周圍爬開;掃描電鏡下見纖毛上皮細胞呈不規則多角形,纖毛周圍可見微絨毛;透射電鏡下可見纖毛上皮細胞間為緊密連接;同一細胞任意兩點纖毛擺動頻率是相同的;同一來源體外培養的鉤突和下鼻甲的...
鼠尾膠原蛋白的提取方法:1.一種生物醫用鼠尾膠原蛋白的提取方法,其特征在于,包括以下步驟:(1)將無組織纖維、脂肪和多糖殘留的鼠尾腱,真空冷凍干燥備用;(2)凍干鼠尾腱經低溫凍干粉碎至200?400目;(3)在冰水浴中將粉碎的鼠尾腱在醋酸溶液中溶脹,鼠尾腱與醋酸的固液比為I克:10mL?I克:120mL,期間不斷攪拌,防止凍結成塊,得到膠原溶脹液;(4)稱取胃蛋白酶加入到膠原溶脹液中,鼠尾腱與蛋白酶質量比為50:I?100:1,在4°C,48?74小時酶解,期間間歇性攪拌。建立利用自制的鼠尾膠原培養大鼠耳蝸邊緣細胞的方法。上海廣州鼠尾膠原一種基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料及其制備方法并在...
膠原蛋白的提取方法:1.堿法提取:堿法提取膠原蛋白常用的處理劑為石灰、氫氧化鈉、碳酸鈉等。如Holzer等[5]采用1%~1.5%石灰水浸泡的方法提取膠原蛋白。由于它容易造成肽鍵水解,因此得到的水解產物分子量比較低。所以,若想保留膠原的三股螺旋結構,此法不可取。2.鹽法提取:鹽法提取膠原蛋白所用的中性鹽有鹽酸-三羥甲基胺基甲烷(Tris-HCl)、氯化鈉、檸檬酸鹽等。在中性條件下,當鹽的濃度達到一定量時,膠原溶解。并且可采用不同濃度的氯化鈉對提取的膠原蛋白進行鹽析處理,可以沉淀出不同類型的膠原蛋白。開蓋在超凈臺上過夜晾干,也可以在室溫放置1小時后。上海鼠尾膠原服務電話鼠尾膠原凝膠體在皮膚細胞原...
鼠尾膠原備用膠凝程序:1)在冰上放置以下物品:膠原蛋白I、無菌10×PBS、無菌蒸餾水、無菌1MNaOH。2)確定膠原蛋白I待使用溶液所需的較終濃度的體積。3)在冰上放置無菌管以收存膠原蛋白I。4)在無菌條件下執行以下步驟。4.1加入10×PBS(終體積/10)mL4.2計算要使用的膠原蛋白I的體積(不要添加到管中直到步驟4.6為止)終體積x終膠原蛋白I濃度(mg/mL)。4.3向10×PBS溶液中加入(要加入的膠原體積×0.023)mL的無菌冰冷1MNaOH。4.4向4.3溶液中加入下述體積的無菌冰冷蒸餾水:添加蒸餾水體積=V(終)—V(膠原蛋白)—V(10×PBS)—V(1MNaOH)4....