為了確定探針是否與相應的基因組DNA雜交，有必要對探針加以標記，以便在結合部位獲得可識別的信號,通常采用放射性同位素32P標記探針的某種核苷酸α磷酸基。但近年來已發(fā)展了一些用非同位素如生物素-親合素系統(tǒng)、地高辛配體等作為標記物的方法。非同位素標記的優(yōu)點是保存時間較長,而且避免了同位素的污染。**常用的探針標記法是缺口平移法(nick translation)。首先用適當濃度的DNA酶Ⅰ（DNAseⅠ）在探針DNA雙鏈上造成缺口，然后再借助于DNA聚合酶Ⅰ（DNa poly merasⅠ）的5’→3’的外切酶活性，切去帶有5’磷酸的核苷酸；同時又利用該酶的5’→3’聚酶活性，使32P標記的互補核苷酸補入缺口，DNA聚合酶Ⅰ的這兩種活性的交替作用，使缺口不斷向3’的方向移動，同時DNA鏈上的核苷酸不斷為32P標記的核苷酸所取代。分析對象是固體物質表面細小顆粒或微小區(qū)域，小范圍直徑為1μm。閔行區(qū)質量探針推薦貨源

DNA探針根據其來源分為3種：一種來源于基因組中的基因本身，稱為基因組探針（genomic probe），可以是基因的全序列，或者基因上的一段序列；另一種是從相應的基因經轉錄獲得mRNA，再通過逆轉錄得到的探針，稱為cDNA探針（cDNA probe）；此外，還可在體外人工合成20～50個堿基的與基因序列互補的DNA片段，稱為寡核苷酸探針。 [1]基因組DNA探針的獲得有賴于分子克隆技術的發(fā)展和應用。要得到一種特異性DNA探針，常常是比較煩瑣的。以細菌為例，細菌的基因組大小約為5×106堿基，約含3000個基因。要獲得某細菌特異的核酸探針，通常要采取建立細菌基因組DNA文庫的辦法，即將細菌DNA切成小片段后（如用限制性內切酶做不完全水解）分別克隆得到包含基因組的全信息的克隆庫，然后用多種其他菌種的DNA探針來篩選，產生雜交信號的克隆被剔除，***剩下的不與任何其他細菌雜交的克隆則可能含有該細菌特異性DNA片段。上海優(yōu)勢探針五星服務近年形成了掃描電鏡-顯微分析儀的聯合裝置，可在觀察微區(qū)形貌的同時逐點分析試樣的化學成分及結構。

血凝素與生物素有非常高的親和性，當血凝素標記上過氧化物酶或堿性磷酸酶，經雜交反應**終形成探針-生物素-血凝素酶復合物（ABC法），酶催化底物顯色，觀察結果。ABC法底物顯色生成不溶物，以便觀測結果。酶標記法復雜、重復性差，成本高，但便于運輸、保存，靈敏度與放射物標記法相當。探針標記方法①缺口平移標記法。利用的是DNA聚合酶I能修復DNA鏈的功能。該法先由DNaseI在DNA雙鏈上隨機切出切口，然后DNA聚合酶I沿缺口水解5´端核苷酸，同時在3´端修復加入被標記核苷酸，切口平行推移。缺口平移法快速、簡便、成本相對較低、比活性相對較高、標記均勻，多用于大分子DNA標記，(>1000bp比較好)，但單鏈DNA、RNA不能用該法標記。

值得一提的是，通過改變外源基因的插入方向或選用不同的RNA聚合酶，可以控制RNA的轉錄方向，即以哪條DNA鏈以模板轉錄RNA。這種可以得到同義RNA探針（與mRNA同序列）和反義RNA探針（與mRNA互補），反義RNA又稱cRNA，除可用于反義核酸研究外，還可用于檢測mRNA的表達水平。在這種情況下，因為探針和靶序列均為單鏈，所以雜交的效率要比DNA-DNA雜交高幾個數量級。RNA探針除可用于檢測DNA和mRNA外，還有一個重要用途，在研究基因表達時，常常需要觀察該基因的轉錄狀況。電子探針的構成除了與掃描電鏡結構相似的主機系統(tǒng)以外，還主要包括分光系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)等部分。

用此探針在DNA文庫中篩選，陽性克隆即是目標蛋白的編碼基因。值得一提的是真核細胞和原核細胞DNA組織有所不同。真核基因中含有非編碼的內含子序列，而原核則沒有。因此，真核基因組DNA探針用于檢測基因表達時雜交效率要明顯低于cDNA探針。DNA探針（包括cDNA探針）的主要優(yōu)點有下面三點：①這類探針多克隆在質粒載體中，可以無限繁殖，取之不盡，制備方法簡便。②DNA探針不易降解（相對RNA而言），一般能有效抑制DNA酶活性。③DNA探針的標記方法較成熟，有多種方法可供選擇，如缺口平移，隨機引物法，PCR標記法等，能用于同位素和非同位素標記。電子探針可以對試樣中微小區(qū)域（微米級）的化學組成進行定性或定量分析。上海優(yōu)勢探針五星服務

電子束轟擊樣品表面將產生特征X射線，不同的元素有不同的X射線特征波長和能量。閔行區(qū)質量探針推薦貨源

③末端標記法（又叫尾標）。利用末端轉移酶可進行“尾標”，尾標適用于寡核苷酸探針標記，寡核苷酸探針多用于核酸“點”突變的檢測，該探針可用核酸合成儀人工合成，克隆出的探針一般較長，特異性好，標記量大，雜交的檢出信號強。探針合成的注意事項①合成探針的長短，一般在20~50個核苷酸之間。合成過長成本高，且易出現聚合酶合成錯誤，雜交時間長，合成太短則特異性下降。②堿基組成G-C應含40%~60%，一種堿基連續(xù)重復不超過4個，以免非特異性雜交產生。③探針自身序列內應無互補區(qū)域，以免產生“發(fā)夾”結構，影響雜交。總之，一個好的探針**終要在實踐中才能加以確認。閔行區(qū)質量探針推薦貨源

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