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亞皮克級數字ELISA開放

來源: 發布時間:2024-12-30

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我們已經開發了兩種臨床相關蛋白的檢測方法——前列腺特異性抗原(PSA)和腫瘤壞死因子α(TNF-α),以確定高酶標記物單體提供的靈敏度轉化為高靈敏度的檢測方法血液中的蛋白質。兩種蛋白質的數字ELISA如圖1所示。開發這些試驗的關鍵參數是:珠子濃度和兩種標記試劑(檢測試劑和酶偶聯物)的濃度。珠子濃度的選擇取決于幾個相互競爭的因素。首先,足夠的珠子必須在場以從熱力學和動力學中捕獲大部分目標分析物從熱力學角度看,100μL中有20萬個珠子,每個珠子大約有8萬個與之結合的抗體25相當于約0.3nM的抗體濃度,在該濃度下,抗體-蛋白平衡導致高捕獲效率(>70%)(D.M.R.,E.P.F.,D.C.D.,未發表工作)。 芯棄疾JX-8B數字ELISA,極速檢測,檢測用時只需要 15-30min!亞皮克級數字ELISA開放

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通過SiMoA對酶標記物進行數字檢測的線性動態范圍由區分“開啟”和“關閉”孔的能力決定。在酶與珠子的比例較低(小于約1:10)時,泊松統計表明,只有統計學上有效果的群體珠子是指含有零和一個酶的珠子。只要足夠多的珠子被檢測,單個酶就可以被檢測到,并且活性珠子的數量會超過泊松分布計數活性微球的噪聲。在酶與微球的高比率(大于約(1:10),活性珠子的比例變得更高,泊松統計表明有大量含有多種酶的微球。為了定量檢測到的酶的數量并保持含有多種酶的微球亞群中的線性對于酶,我們使用泊松統計法將活性珠子的數量轉換為檢測到的酶的數量 什么是數字ELISA購買靈活新型的單分子檢測方法的普及版;

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從TNF-α數字ELISA測定的檢測限為~150aM(2.5fg/mL),相當于全血中的~600aM(10fg/mL);市場上可用的ELISA對TNF-α的比較高靈敏度在血清中的LOD為21fM(0.34pg/mL)(補充圖3)。兩種方法的目標蛋白零濃度尖峰均為為這些實驗提供有用的陰性對照:25%的血清含有多種蛋白質的微摩爾濃度,在這些高蛋白質背景之上可以檢測到非常低濃度的目標蛋白。我們還開發了一個證明用于顯示低濃度核酸可以檢測到的DNA的主要數字分析方法,而無需復制目標


    芯棄疾JX-8B數字ELISA產品每個生物實驗室都用得起的單分子免疫檢測SiMoA通過將單個酶產生的熒光團限制在極小范圍內,從而能夠檢測到非常低濃度的酶標記物體積(~50fL),導致熒光產物分子的局部高濃度。為了在免疫測定中實現這種定位,在第二步中,將珠子加載到一個陣列為離散的微升大小的孔(圖1C)。本研究中使用的2毫米寬陣列有~50,000個孔,孔徑為μm,孔深為μm。加載后的陣列在含有熒光酶底物液滴的情況下,用橡膠密封圈密封。Rissin等人,第3頁將每個微球隔離在飛升反應室中。具有單一酶的微球標記的免疫復合物在50飛升的反應室中產生局部高濃度的熒光產物(圖1D)。通過使用標準顯微鏡光學系統獲取陣列的時間變化熒光圖像,可以區分與單一酶分子相關的微球(“開啟”孔)和不與酶相關的微球(“關閉”孔);補充圖1顯示了“開啟”和“關閉”孔的熒光直方圖。成像陣列可以成千上萬的單個免疫復合物同時檢測。通過測定供試品中的蛋白質濃度來確定計算含有珠子和熒光產物的孔數相對于含有珠子的孔數(圖1D)。使用SiMoA,濃度是因此,我們稱SiMoA應用于檢測單個免疫復合物為數字ELISA。 芯棄疾JX-8B簡易版單分子ELISA檢測產品, 極速檢測,快至15min能完成 的ELISA檢測!

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