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浙江凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)

來源: 發(fā)布時(shí)間:2024-10-09

用于離心柱中糖蛋白去膠基化的固定化酶。Genovis的FucosEXO固定化離心柱含有與瓊脂糖珠共價(jià)偶聯(lián)的FucosEXO酶,用于糖蛋白的去氟糖基化,而不會(huì)用酶污染z終制劑。Microspin 色譜柱可用于 5 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白的去膠基化。1. 易于使用的離心柱;2. 提高酶與底物的比例,提高消化效率;3. z終樣品中不含酶。有效去除α1-2,3,4連接巖藻糖:分析用復(fù)雜聚糖結(jié)構(gòu)修飾的糖蛋白可能具有挑戰(zhàn)性,需要高效和特異性的酶學(xué)工具。Genovis的FucosEXO 是 α-巖藻糖苷酶的混合物,用于有效水解 N-和 O-糖蛋白或寡糖上的 α1-2、α1-3 和 α1-4 連接的巖藻糖殘基,無需輔助因子或添加FucosEXO 在1小時(shí)內(nèi)對(duì)所有三種 TNFR 蛋白去巖藻糖磺酸處理。浙江凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)

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Genovis的PNGase F Automation 含有以自動(dòng)化友好的 96 孔板形式凍干的 PNGase F 酶。它能夠?qū)崿F(xiàn)高通量 N-糖去除,從而簡(jiǎn)化一系列糖蛋白底物的下游分析。根據(jù)您的工作流程要求和樣品可用性。PNGase F Automation 可在 96 孔板中凍干,用于 96 x 5 μg 或 96 x 50 μg 糖蛋白上的 N-糖自動(dòng)水解。1. 實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化高通量樣品處理;2. 可同時(shí)消解多達(dá) 96 個(gè)樣品;3. 兩種選擇可用于不同樣品量的消解;4. 即用型 - 只需添加您的樣品即可。用于消化粘蛋白型O-糖蛋白和肽(包括唾液酸化O-聚糖)的凍干酶。Genovis的ImpaRATOR 凍干劑以凍干粉末的形式提供,裝在 2000 單位小瓶中,用于消化 2 mg O-糖基化蛋白。1. 用于方法開發(fā)的靈活產(chǎn)品形式;2.以結(jié)合酶以提高效率;3. 適用于自動(dòng)化工作流程;4. 即用型 - 只需加水即可!上海PNGaseF去糖基化酶SialEXO是用于去除和分析唾液酸的唾液酸酶;

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Genovis的OglyZOR 是一種內(nèi)切糖苷酶(O-糖苷酶),可特異性水解天然糖蛋白上的he心 1 O-聚糖。OglyZOR 用于去除 O-糖,用于糖分析、確認(rèn) O-糖的存在和降低樣品的異質(zhì)性。Genovis的OglyZOR 是一種內(nèi)切糖苷酶(內(nèi)切-α-N-乙酰半乳糖氨酸酶),可催化來自天然糖蛋白的he心 1 和有限程度的he心 3 O-聚糖的水解。 OglyZOR酶活性需要去除唾液酸,因此,由唾液酸酶混合物組成的唾液酸凍干,用于去除α2-3,α2-6和α2-8連接的唾液酸,與OglyZOR一起提供。在pH 6.5至7.5和37°C下獲得良好活性。

GlycOCATCH設(shè)計(jì)用于特異性結(jié)合粘蛋白型O-糖基化蛋白和肽。親和樹脂基于無活性的Genovis的OpeRATOR酶,該酶經(jīng)過工程設(shè)計(jì),可以高親和力結(jié)合O-糖基化蛋白和肽。 結(jié)合在pH 5-8的生理緩沖液中進(jìn)行。由于GlycOCATCH樹脂和O-糖蛋白/肽之間的強(qiáng)相互作用,可以用8M尿素進(jìn)行洗脫。或者,可以使用活性O(shè)peRATOR酶進(jìn)行洗脫,該酶消化O-聚糖位點(diǎn)的N末端結(jié)合的O-糖蛋白。在后一種情況下,肽在天然條件下回收。OpeRATOR 凍干酶包含在購買中。由于 O-糖蛋白上的旋亞氨酸化 O-聚糖與樹脂結(jié)合效率更高,因此唾液酸酶混合物 SialEXO 凍干也包含在購買中。PNGase F(肽 N-糖苷酶 F)是一種糖酰胺酶,可水解內(nèi)層 GlcNAc 之間的酰胺鍵。

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蛋白質(zhì)的N-糖基化特征是一個(gè)關(guān)鍵的質(zhì)量屬性。它會(huì)影響生物制藥的安全性和有效性,因此需要在開發(fā)和生產(chǎn)過程中進(jìn)行表征和監(jiān)測(cè)。常見的聚糖分析工作流程是用PNGase F釋放N-聚糖,然后用熒光標(biāo)記物(如2-AB、2-AA、普魯卡因胺或RapiFluor-MS?(沃特世公司))標(biāo)記生成的聚糖。然后使用HILIC-HPLC或毛細(xì)管電泳分離標(biāo)記的聚糖,以表征和定量不同的聚糖結(jié)構(gòu)。 在這里,使用游離聚糖方法分析zhiliao性抗體曲妥珠單抗、Fc-融合蛋白依那西普和糖蛋白R(shí)Nase B的N-聚糖。曲妥珠單抗和依那西普在天然條件下在37°C下用Genvois的PNGase F去糖基化1小時(shí),而RNase B需要變性和還原才能完全去糖基化。因此,在50°C下用PNGase F去糖基化10分鐘之前,用RapiGest? SF表面活性劑(沃特世公司)和TCEP處理RNase B。 用RapiFluor-MS標(biāo)記所得游離的聚糖,并通過HILIC UPLC-FLD-MS進(jìn)行分析。SialEXO酶來源于Akkermansia muciniphila,并在大腸桿菌中表達(dá)。浙江凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)

SialEXO在天然條件下水解糖蛋白,在pH值范圍為6.5至9時(shí)顯示出活性。浙江凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)

糖蛋白性能測(cè)試:O-聚糖的巖藻糖基化參與功能上重要的聚糖表位的合成,例如血型抗原和劉易斯結(jié)構(gòu)。分析用這種復(fù)雜的聚糖結(jié)構(gòu)修飾的糖蛋白可能具有挑戰(zhàn)性,需要高效和特異性的酶工具。我們?cè)谠S多糖基工程TNFR蛋白上測(cè)試了Genovis的FucosEXO,這些蛋白攜帶多達(dá)11個(gè)O-聚糖,這些O-聚糖以不同的鍵裝飾。我們將該活性與其他市售巖藻苷酶進(jìn)行了比較。FucosEXO 能夠在 1 小時(shí)內(nèi)對(duì)所有三種 TNFR 蛋白進(jìn)行去巖藻糖磺酸處理,而用其他巖藻糖酶處理導(dǎo)致部分去除巖藻糖或根本沒有去除。浙江凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)

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