從依那西普水解β1-3和β1-4半乳糖：Genovis的GalactEXO Immobilized 對 β1-3 和 β1-4 連接的半乳糖均具有酶活性，這些半乳糖存在于裝飾有 N- 和 O-連接糖基化的生物制藥中，例如 Fc-融合蛋白依那西普。將依那西普與GalactEXO固定化孵育60分鐘，并在FabRICATOR消化后使用LC-MS在亞基水平上研究酶活性。TNFR和Fc/2片段分別分析。與GalactEXO Immobilized孵育導致N-連接和O-連接聚糖上的半乳糖殘基水解，這在半乳糖基化物種中被視為信號丟失。對游離的N-聚糖分析證實了LC-MS數據。對天然糖蛋白或游離的聚糖結構上存在的 N- 和 O-連接聚糖均具有活性。安徽PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究

在這里，Genovis分析了 C1 抑制劑——一種人血漿衍生的生物zhiliao藥物，由 6 種 N-聚糖和多達 28 種 O-聚糖修飾，主要由唾液酸he心 1 結構組成。在不對這種高度異質的蛋白質進行任何預處理的情況下，反相LC-MS分析產生了無法詳細解釋的復雜質譜圖。在天然條件下使用OmniGLYZOR Microspin色譜柱，可在3小時內有效去除所有O-聚糖。然而，蛋白質上仍殘留著 1 到 3 個 N-聚糖。使用凍干的PNGase F和OmniGLYZOR試劑盒中包含的MS友好型RapiGest? SF表面活性劑*，在變性條件下通過額外的去糖基化步驟去除這些不可接近的N-聚糖。觀察到所有聚糖的完全去除，但分子上存在的少量he心 2 O-聚糖除外。水解O-聚糖的酶不會從變性中獲益，這就是為什么OmniGLYZOR Microspin色譜柱只能在非變性條件下使用的原因。河北N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶瑞典GenovisFucosEXO酶在大腸桿菌中表達，帶有His標簽，分子量為87 kDa和64 kDa，在6至8的pH值范圍內顯示出高活性。

Genovis的SialEXO Immobilized是一種微離心柱，用于在室溫下孵育30分鐘后完全去除0.5mg天然糖蛋白上的唾液酸。為了研究依那西普的潛在電荷變體，開發了一種使用SialEXO固定化柱對糖蛋白進行去唾液酸化的一般工作流程。毛細管電泳通常用于在生物制劑的表征和質量控制過程中確定電荷變體。使用SialEXO Imfixedized對糖蛋白進行去唾液酸化，并使用ProteinSimple的Maurice在成像等電聚焦中進行分析。綜合起來，該分析工作流程改進了糖蛋白的分離并實現了電荷異構體分析。依那西普，如果不首先去除唾液酸，將很難分析，但使用SialEXO固定化分離峰可以獲得。

用于水解離心柱中糖蛋白上的N-聚糖的固定化酶。 Genovis的PNGase F 固定化微離心柱含有與瓊脂糖珠共價偶聯的 PNGase F 酶，用于在樣品中酶峰減少的糖蛋白上水解 N-糖。 將糖蛋白樣品與PNGase F一起在離心柱中固定，然后通過離心步驟輕松收集去糖基化的蛋白質。由于空間位阻，PNGase F對某些糖蛋白的活性可能緩慢或受到抑制 - 在這些情況下可能需要更長的孵育時間或糖蛋白變性。 Microspin 色譜柱可用于水解 5 或 10 x 0.2 mg 糖蛋白。1. 易于使用的離心柱；2. 提高酶與底物的比例，提高消化效率；3.z終樣品中的酶峰減少。FucosEXO 是α-巖藻糖苷酶混合物。

Genovis的SialEXO產品是用于去除和分析唾液酸的唾液酸酶。這些酶對天然糖蛋白或游離的聚糖結構上存在的 N- 和 O-連接聚糖均具有活性。SialEXO用于在用OpeRATOR或OglyZOR消化之前預處理O-糖基化蛋白。其他應用包括降低樣品復雜性、電荷異構體分析和外切糖苷酶陣列。N-連接、O-連接和游離聚糖的高效去唾液酸化快速去除唾液酸，增強對蛋白質電荷變體的分析可固定在即用型離心柱中。然后可以用FabRICATOR消化所得的去糖基化蛋白，并通過中級質譜分析。我們將該工作流程應用于依那西普的分析，雖然未經處理的TNFR結構域過于復雜而無法分析，但O-聚糖組成可以在用PNGase F處理后進行分離和比較。使用OpeRATOR進行O-糖位點定位：OpeRATOR 是一種 O-聚糖特異性蛋白酶。湖北固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究

OglyZOR 是一種內切糖苷酶用于確認O-糖的存在和降低樣品的異質性。安徽PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究

GalactEXO中的酶來源于Akkermansia muciniphila，并在大腸桿菌中表達。GalactEXO由兩種半乳糖苷酶組成，均帶有His標簽，組分的分子量為87 kDa和109 kDa。用于水解糖蛋白上β1-3,4-連接半乳糖的凍干酶。Genovis的GalactEXO 凍干劑以凍干粉的形式提供，裝在 2000 單位小瓶中，用于在 2 mg 糖蛋白上水解 β1-3,4-連接的半乳糖。1. 用于方法開發的靈活格式；2. 可以結合酶以提高效率； 3. 適用于自動化工作流程；4. 即用型 - 只需加水即可！將混合物加載到GlycOCATCH上，洗滌樹脂，并用8M尿素洗脫結合的肽。純化后，在RP-LC-MS上分離樣品。數據顯示，糖苷酸肽的選擇性純化，攜帶he心1-O-聚糖。IgA 特異性 O-糖肽富集：IgA 抗體包含 N-連接的糖基化和重度 O-糖基化的鉸鏈區域。胰蛋白酶消化IgA后，將肽和genovis 的SialEXO的混合物加載到GlycOCATCH樹脂上，并用PBS和離心洗滌。用 8 M 尿素洗脫顯示預期的 O-糖基化鉸鏈肽富集，具有不同程度的糖基化。安徽PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究