天津熱原檢測體系

來源：發(fā)布時間：2025-11-10

生物制品（如單克隆抗體、重組蛋白、細胞因子）因基質(zhì)成分復(fù)雜（含高濃度蛋白質(zhì)、螯合劑、表面活性劑、緩沖鹽等），在熱原檢測過程中易出現(xiàn)“反應(yīng)抑制”或“非特異性增強”現(xiàn)象，嚴重影響檢測結(jié)果準確性。選擇抗干擾能力更強的檢測方法至關(guān)重要，重組級聯(lián)試劑（rCR）因采用完整級聯(lián)反應(yīng)路徑，抗干擾性優(yōu)于天然 LAL；單核細胞活化反應(yīng)測定（MAT）對復(fù)雜基質(zhì)耐受性更高，通過適當(dāng)稀釋即可消除多數(shù)干擾，因此生物制品熱原檢測常采用 “rCR 法（內(nèi)毒素定量）+ MAT 法（全熱原篩查）” 的聯(lián)合方案，既保證內(nèi)毒素檢測的準確性，又防控非內(nèi)毒素?zé)嵩L(fēng)險。

熱原進入血液后，TLR信號迅速活化NF-κB通路，驅(qū)動單核細胞釋放IL-1β、IL-6、TNF-α因子風(fēng)暴。天津熱原檢測體系

革蘭氏陽性菌注射劑產(chǎn)品只依賴內(nèi)毒素檢測存在安全風(fēng)險，需結(jié)合熱原檢測特性制定防控方案。內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌細胞壁的脂多糖成分，而革蘭氏陽性菌可產(chǎn)生非內(nèi)毒素?zé)嵩∟EPs），如脂磷壁酸，這類物質(zhì)同樣能引發(fā)人體發(fā)熱反應(yīng)，若只檢測內(nèi)毒素，可能遺漏 NEPs 污染，導(dǎo)致臨床用藥風(fēng)險。對此，風(fēng)險評估需重點關(guān)注三點：一是建議開展家兔法與內(nèi)毒素檢測的一致性實驗，對比兩種方法的檢測結(jié)果，排查是否存在內(nèi)毒素未檢出但家兔法陽性的情況；二是采用 MAT 法熱原檢測，其通過單核細胞活化機制，可同時識別內(nèi)毒素與 NEPs，若 MAT 法檢測陽性，需進一步追溯 NEPs 來源；三是若無法排除 NEPs 風(fēng)險，必須按藥典要求補充熱原檢測（如 MAT 法或家兔法），而非只依賴內(nèi)毒素檢測。尤其對于新藥或工藝變更后的產(chǎn)品，需通過多方法驗證，確保熱原檢測覆蓋所有潛在致熱物質(zhì)，保障臨床用藥安全。

浙江熱原檢測體系基于人體免疫機制的 MAT 熱原檢測，為熱原檢測提供了新的可靠途徑。

MAT 法與傳統(tǒng)家兔法在熱原檢測中，性能差異明顯，MAT 法在準確性、效率與合規(guī)性上更具優(yōu)勢。從結(jié)果評判來看，MAT 法以 “加標(biāo)回收率 50%-200%、供試品濃度 < 規(guī)定限值（CLC）” 為合格標(biāo)準，靈敏度達 0.0125EU/mL，可準確定量熱原濃度；而家兔法只能定性（觀察體溫升高），靈敏度低（約 0.1-0.5EU/mL），易因家兔個體差異（如免疫狀態(tài)、應(yīng)激反應(yīng)）導(dǎo)致假陰性。從檢測效率來看，MAT 法樣品與細胞共培養(yǎng) 24 小時即可出結(jié)果，且可批量檢測（96 孔板一次處理多個樣品）；家兔法需連續(xù)觀察 72 小時，每次只能檢測少量樣品，耗時且人力成本高。從合規(guī)性來看，MAT 法不使用動物，符合 3R 原則，已被歐盟接受（EP 刪除家兔法）；家兔法因動物實驗屬性，面臨歐盟等地區(qū)的法規(guī)限制。此外，MAT 法重復(fù)性優(yōu)（復(fù)孔 CV 可控制在 30% 以內(nèi)），家兔法因個體差異 CV 常超 50%，進一步凸顯 MAT 法在現(xiàn)代熱原檢測中的優(yōu)勢。

PBMC（外周血單個核細胞）用于 MAT 熱原檢測時，存在異質(zhì)性與血源供應(yīng)兩大關(guān)鍵問題。從異質(zhì)性來看，PBMC 含 12% 單核細胞與 88% 淋巴細胞，且來自不同供體，細胞組成、功能狀態(tài)及熱原反應(yīng)存在明顯差異，導(dǎo)致熱原刺激后 IL-6 釋放量波動大，標(biāo)準化難度高。血源供應(yīng)方面，除受獻血者數(shù)量、時間及采集血液政策限制外，EP2.6.30 還要求嚴格檢測乙肝、丙肝等標(biāo)志物，且采集血液、處理、試劑制備全程需無菌操作，流程環(huán)節(jié)多、復(fù)雜度高，遠不及單核細胞系制備簡便，易影響熱原檢測的時效性與穩(wěn)定性。細胞因子IL-6因穩(wěn)定性高、半衰期長，被選為熱原檢測MAT法關(guān)鍵定量指標(biāo)，優(yōu)于TNF-α與IL-1β。

PBMC（外周血單個核細胞）的供體差異會直接導(dǎo)致熱原檢測結(jié)果的波動，主要體現(xiàn)在 IL-6 釋放水平的不一致。不同供體的 PBMC，其單核細胞比例、TLR 受體表達量、免疫活性狀態(tài)存在差異：有的供體 PBMC 受熱原刺激后， IL-6 釋放量高；有的則極低，甚至無明顯響應(yīng)。實驗數(shù)據(jù)顯示， PBMC 的標(biāo)曲各濃度點相對偏差有高達 171.43%的，正是這種差異的體現(xiàn)，導(dǎo)致熱原檢測結(jié)果難以標(biāo)準化，無法準確判斷供試品熱原是否超標(biāo)，從而增加了藥品的質(zhì)量控制風(fēng)險。

當(dāng)熱原侵入人體循環(huán)系統(tǒng)，單核細胞表面的TLR即刻化身分子雷達，準確捕獲LPS、LTA等外源致熱物。北京原料藥熱原檢測常見問題分析

單核細胞活化試驗MAT通過量化人源單核細胞的免疫應(yīng)答，實現(xiàn)對LPS、脂磷壁酸、β-葡聚糖的同步檢測。天津熱原檢測體系

傳統(tǒng)熱原檢測方法的局限性十分明顯：鱟試驗法只能特異性識別細菌內(nèi)毒素，對非內(nèi)毒素?zé)嵩耆珶o響應(yīng)；家兔熱原試驗雖能篩查全類型熱原，但靈敏度低（檢測限≥5EU/kg），無法檢出微量非內(nèi)毒素?zé)嵩覠o法區(qū)分熱原類型，難以追溯污染源頭；單核細胞活化反應(yīng)測定（MAT）的出現(xiàn)有效解決了上述難題，其關(guān)鍵優(yōu)勢在于：基于人源單核細胞的免疫應(yīng)答機制，可同時識別所有具備生物活性的熱原（包括內(nèi)毒素與非內(nèi)毒素），且檢測靈敏度高（對病毒熱原檢測限低至pg級）；檢測周期短（24-48小時），可滿足產(chǎn)品快速放行需求；能通過細胞因子濃度定量評估熱原活性，避免“無活性熱原”的誤判。

天津熱原檢測體系

標(biāo)簽：熱原檢測支原體檢測內(nèi)毒素檢測宿主細胞殘留DNA檢測宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測

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天津熱原檢測體系

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