福建重組藥物支原體檢測可比性驗證

來源：發(fā)布時間：2025-11-11

支原體檢測 NAT 方法驗證需滿足全球藥典對檢測限、專屬性、耐用性、可比性等關(guān)鍵指標(biāo)的要求，且 EP、USP 新草案提出更嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)。檢測限（LOD）方面，EP 要求針對每種支原體確定臨界值，需 3 次單獨 10 倍梯度稀釋、共 24 個檢測數(shù)據(jù)，95% 檢出濃度達標(biāo)；USP 要求標(biāo)準(zhǔn)菌株濃度≤10 CFU/mL 或 100 GC/mL，≥24 次檢測數(shù)據(jù)支持統(tǒng)計分析；ChP 未明確支原體專屬要求，但需滿足 “微生物檢出下限數(shù)量” 設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)。專屬性上，EP 建議測試革蘭氏陽性菌交叉污染，USP 要求生信分析與實際樣品驗證結(jié)合，ChP 強調(diào)外來成分不干擾試驗。耐用性方面，EP 需驗證試劑濃度、提取與反應(yīng)程序變化，USP 涵蓋設(shè)備、反應(yīng)體系等參數(shù)波動。可比性上，EP 要求 NAT 法與藥典法 LOD 及特異性對比，替代培養(yǎng)法需達 10 CFU/mL，替代指示細胞法需達 100 CFU/mL，USP 則視樣品基質(zhì)情況要求可比性研究。

支原體標(biāo)準(zhǔn)菌株對支原體檢測試劑盒的選擇、使用及驗證至關(guān)重要。福建重組藥物支原體檢測可比性驗證

支原體 NAT 檢測的樣本結(jié)果需結(jié)合 FAM 信號與 VIC 信號的表現(xiàn)綜合判定，同時警惕抑制現(xiàn)象對結(jié)果的影響。若 FAM 信號 2 復(fù)孔有 1 孔以上 Ct<40 且呈有效 “S” 型擴增，VIC 信號 2 復(fù)孔 Ct<40 且呈有效 “S” 型擴增，判定為陽性；若 VIC 信號 2 復(fù)孔 Ct≥40 或無明顯擴增曲線，則為陽性但存在抑制。若 FAM 信號 2 復(fù)孔 Ct≥40 或無明顯擴增曲線，VIC 信號 2 復(fù)孔 Ct<40 且呈有效 “S” 型擴增，判定為陰性；若 VIC 信號同樣 Ct≥40 或無明顯擴增曲線，則陰陽性無法判斷且存在抑制。出現(xiàn)抑制現(xiàn)象需重測，重測仍有抑制時，陽性傾向樣本可適當(dāng)稀釋，陰性傾向樣本需優(yōu)化提取條件。

安徽疫苗產(chǎn)品支原體檢測指示細胞培養(yǎng)法湖州申科提供支原體檢測 qPCR 法方法學(xué)驗證服務(wù)，含檢測限、專屬性、可比性等全維度驗證。

培養(yǎng)基的科學(xué)選擇與合規(guī)使用是支原體培養(yǎng)法檢測成功的基礎(chǔ)，湖州申科按 USP 標(biāo)準(zhǔn)明確了三類推薦培養(yǎng)基的適用場景。Hayflick Media 用于支原體一般性檢測，F(xiàn)rey Media 專門針對滑液囊支原體檢測，F(xiàn)riis Media 則適用于非禽類支原體檢測。為確保少量支原體（約 100cfu 或 100ccu）不被遺漏，需使用足夠數(shù)量的固體與液體培養(yǎng)基開展檢測；若選用其他替代培養(yǎng)基，必須嚴(yán)格符合 USP 標(biāo)準(zhǔn)要求。此外，每批培養(yǎng)基均需進行針對性的微生物檢測（即營養(yǎng)特性測試），通過標(biāo)準(zhǔn)化的質(zhì)量把控，避免因培養(yǎng)基性能缺陷導(dǎo)致檢測失效，為后續(xù)檢測流程提供穩(wěn)定可靠的基礎(chǔ)條件。

湖州申科構(gòu)建了具有完備資質(zhì)的支原體技術(shù)服務(wù)平臺，為企業(yè)提供多元化支持。平臺擁有 BSL-2/P2 微生物實驗室備案資質(zhì)，遵循 GMP-like 質(zhì)量體系，具備支原體培養(yǎng)法、指示細胞法與 qPCR 法的檢測及驗證能力，配備符合藥典要求的支原體標(biāo)準(zhǔn)菌株庫與高靈敏度培養(yǎng)基（含液體、固體、半流體）。企業(yè)已通過 ISO13485:2016 質(zhì)量管理體系認(rèn)證（證書號 MD 709873），檢測中心獲得 CNAS 認(rèn)證（注冊號 CNAS L21942），符合 ISO/IEC 17025:2017 標(biāo)準(zhǔn)，具備國際互認(rèn)資質(zhì)。平臺可提供多元化技術(shù)服務(wù)，包括支原體 qPCR 法檢測能力建立、實驗員能力考核、質(zhì)量體系與流程搭建、實驗室設(shè)計方案優(yōu)化，以及樣品檢測（三種方法）、樣品適用性驗證、方法學(xué)驗證、傳統(tǒng)法與 qPCR 法比對、特殊菌株定制生產(chǎn)等，申報階段可配合客戶與監(jiān)管機構(gòu)完成現(xiàn)場審計。

USP<77> 要求支原體檢測NAT法專屬性需經(jīng)生信分析與實際樣品驗證，排除近緣菌交叉反應(yīng)。

長期以來，支原體檢測主要依賴培養(yǎng)法和指示細胞法，且法規(guī)通常要求兩種方法同時使用，但這兩類方法存在明顯短板——培養(yǎng)法檢測周期長達 28 天，指示細胞法也需較長時間等待結(jié)果。隨著細胞療法藥物快速發(fā)展，其上市周期短、貨架期有限的特點，使得傳統(tǒng)方法難以滿足藥物放行的時效要求。核酸擴增技術(shù)（NAT）尤其是熒光探針 qPCR 檢測方法的出現(xiàn)，憑借檢測速度快、特異性強的優(yōu)勢，成為支原體檢測的理想替代方案。作為替代方法，NAT 檢測需通過嚴(yán)格驗證以達到法規(guī)要求的靈敏度：檢測限達到 10CFU/mL 可替代培養(yǎng)法，達到 100CFU/mL 可替代指示細胞培養(yǎng)法，從而實現(xiàn)快速且可靠的支原體篩查。

支原體標(biāo)準(zhǔn)菌株在生物制藥與生物檢測行業(yè)中承擔(dān)著關(guān)鍵角色，其重要性將隨著生物制品的發(fā)展而愈發(fā)凸顯。安徽生物制品支原體檢測試劑盒

湖州申科已為多家頭部企業(yè)提供支原體檢測方案，支持 BLA/NDA 申報。福建重組藥物支原體檢測可比性驗證

2023 年美國國立衛(wèi)生研究院（NIH）的對比研究得出一個結(jié)論是并非所有商業(yè)化支原體檢測試劑盒都能滿足替代傳統(tǒng)方法的要求，研究對市面上 5 款主流試劑盒（ATCC、梅里埃、賽默飛、羅氏、MB）進行測試，發(fā)現(xiàn)不同試劑盒對不同支原體菌株的檢測靈敏度差異明顯，部分產(chǎn)品無法達到宣稱的≤10 CFU/mL 檢測限（符合歐、日藥典替代培養(yǎng)法的要求）。例如，ATCC 試劑盒對萊氏無膽甾原體、精氨酸支原體的檢測限只為 100 CFU/mL，MB 試劑盒對硬蜱螺原體無法檢出（>1000 CFU/mL）。這一現(xiàn)象表明，試劑盒的檢測性能與支原體菌株特性密切相關(guān)，因此企業(yè)需根據(jù)待測樣品的原輔料來源和檢測目的，對試劑盒進行嚴(yán)格的性能驗證，避免因檢測限不達標(biāo)導(dǎo)致質(zhì)量風(fēng)險。

福建重組藥物支原體檢測可比性驗證

標(biāo)簽：支原體檢測內(nèi)毒素檢測熱原檢測宿主細胞殘留DNA檢測宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測

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